問題1::血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長嗎?
答:如果運(yùn)輸過程中,出現(xiàn)了溫度忽高忽低,反復(fù)凍融的情況,就容易析出大量沉淀。另外,不正確的解凍方法也會(huì)引起血清產(chǎn)生大量沉淀。但一般情況下,沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng),但如果細(xì)胞對(duì)于營養(yǎng)物質(zhì)有特殊需求,沉淀物中的成分不能被細(xì)胞吸收,可能會(huì)引起細(xì)胞長勢較差。
問題2:血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞實(shí)驗(yàn)嗎?
答:會(huì)影響血清過濾。一些特殊實(shí)驗(yàn)中,需要對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行過濾,如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物,混入培養(yǎng)基中,會(huì)導(dǎo)致過濾孔被堵塞,影響過濾效果。多數(shù)情況下,血清沉淀會(huì)對(duì)我們判斷細(xì)胞是否出現(xiàn)污染造成困擾。絮狀沉淀容易和真菌、細(xì)菌混淆;磷酸鈣沉淀引起的小黑點(diǎn)容易與支原體污染混淆。
問題3:血清沉淀導(dǎo)致細(xì)胞污染嗎?
答:一般情況下,正常的沉淀物不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞污染。需要注意的是,如果血清保存不當(dāng)或使用過程中操作失誤,導(dǎo)致血清被微生物、細(xì)胞等物質(zhì)污染,反而會(huì)引起血清產(chǎn)生沉淀。
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,選擇高品質(zhì)的血清對(duì)于維持實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定十分重要。
Ausbian澳洲進(jìn)口特級(jí)胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
7.參與細(xì)胞凍存。
在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(最常見為10%)的。具體到不同試驗(yàn),應(yīng)依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),或細(xì)胞類型或基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分來確定適宜濃度。胎牛血清應(yīng)在-20℃儲(chǔ)存,運(yùn)輸應(yīng)干冰冷鏈運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優(yōu)良品質(zhì)。